Wednesday , October 24 2018
Trang chủ / Kỹ thuật y khoa / Kỹ thuật y khoa nhuộm kháng ACID

Kỹ thuật y khoa nhuộm kháng ACID

Dựa trên nguyên tắc nào để nhuộm kháng ACID

Do các tế bào vi khuẩn kháng  thành phần của acid có ở lớp vỏ sáp để bao bọc nên khi đã được nhuộm  phức hợp cho màu chất carbolfuchsin, thì phức hợp này sẽ không cần phải tẩy màu bởi các dung dịch tẩy màu rất mạnh như: chất acid, chất  alcohol acid. Để phức hợp màu này thì có thể thấm xuyên qua các lớp vỏ sáp của con vi khuẩn, sẽ có hai cách để phức hợp: cách 1: Đun nóng và phết nhuộm với các dung dịch màu chất carbolfuchsin, và nhờ  vào đó mà chất carbolfuchsin thấm qua lớp vỏ sáp của con vi khuẩn để nhuộm màu cho vi khuẩn; đây là được gọi là phương pháp nhuộm nóng của Ziehl Neelsen.  Cách 2 là phương pháp dùng nhuộm lạnh haycòn gọi là phương pháp dùng Kinyoun, trong loại phương pháp này người ta thường dùng dung dịch của carbolfuchsin rất đậm đặc, nhờ vậy mà khi phủ các dung dung dịch màu rất đậm đặc này lên  rồi phết nhuộm với thời gian  khá lâu, các carbolfuchsin có thể sẽ thấm qua các lớp vỏ sáp để nhuộm màu cho vi khuẩn.

Kỹ thuật y khoa nhuộm kháng ACID

2_Các bước chuẩn bị

-Dụng cụ cần dùng: Que cây, lam kính sạch, giá nhuộm,boocan, giá cắm, bôcan…

-Hoá chất cần có: Các loại thuốc nhuộm của Ziehl Neelsen: cồn acid, chất fuchsin kiềm với phenol hay  xanh methylen blue. Bộ chứa thuốc nhuộm kháng của acid này được chứa trong những chai có màu sẩm màu, hay được nắp vặn chặt, giữ trong điều kiện tối ở mức nhiệt độ phòng.

-Bệnh phẩm như: các dịch khác như dịch màng não, đờm hay dịch màng phổi…

Nhuộm kháng ACID

Nhuộm kháng ACID

3_Cách tiến hành phương pháp này

-Đầu tiên đánh dấu tiêu bản.

-Đặt cố định tiêu bản bằng cách dùng nhỏ 1 giọt cồn 90[sup]0[/sup] lên trên tiêu bản rồi dùng đốt cháy cồn hay hơ qua ngọn lửa của đèn cồn 3 lần.

-Phủ thuốc có nhuộm Fuchsin Ziehl kín hết tất cả diện tích dàn cũng như bệnh phẩm, chúng ta dùng que bông cồn để đốt cháy nhẹ dưới các lam kính cho đến khi xuất hiện trên mặt đồ phiến thấy bốc hơi thì dừng lại, đốt đi đốt lại  như vậy khoảng 3 lần. Rồi rửa dưới vòi nước chảy nhẹ.

-Tẩy màu với  các hỗn hợp cồn cảu acid bằng cách nhúng tiêu bản  trực tiếp vào bình có chứa cồn của acid, khi nào đưa lên thì chỉ còn các vết đỏ nhạt là được.

-Rửa nước lại một lần nữa

-Nhuộm xanh chất methylen trong 30 giây, rồi rửa nước, xong để khô soi kính hiển vi.

4_Đọc kết quả của phương pháp này

-Chúng ta quan sát các vết phết nhuộm kháng của acid qua kính hiển vi hay dưới vật có kính dầu,  thấy rằng trực khuẩn kháng của acid bắt đầu có màu đỏ cánh sen, hình mảnh, còn có vi khuẩn thường như nền khác đặc biệt như là tế bào biểu mô hoặc bạch cầu rất bắt màu xanh.

-Khi trả lời về một kết quả nhuộm kháng của acid, Chúng ta không được kết luận vội vàng là dương tính M. tuberculosis mà chỉ có thể trả lời là có hiện diện trực khuẩn của kháng acid.

5_Các sai lầm kỹ thuật thường gặp trong phương pháp nhuộm kháng của acid

-Phết nhuộm quá dày sẽ làm cho alcohol acid không thể tẩy tất cả hết các màu carbolfuchsin, do đó mà trực khuẩn không kháng của acid vẫn bị bắt màu đỏ cánh sen. Dù vậy nhưng có thể phân biệt là đây không phải là một vi khuẩn kháng acid khi quan sát thấy màu vùng nhầy hoặc tế bào biểu mô, bạch cầu xung quanh mà vẫn còn màu đỏ điều này chứng tỏ màu sẽ không bị tẩy hết. Đôi khi trực khuẩn không có một hình dạng tiêu biểu như của trực khuẩn của kháng acid như mập hay không mảnh khảnh cụ thể như trực khuẩn kháng của acid thực sự.

-Màu của carbolfuchsin bị cặn, làm đóng lên phết nhuộm dẫn tới alcohol acid không thể tẩy hết đi màu và vì thế mà vi khuẩn thường vẫn bị nhuộm màu đỏ cánh sen như ở trên. Để không ảy ra tình trạng này phải thường xuyên lọc các màu qua giấy lọc khi kiểm tra nhỏ màu của carbolfuchsin lên  trên một lam trống hay thấy có cặn sau  khi dùng đổ bỏ của carbolfuchsin khỏi lam.